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卵母细胞与胚胎玻璃化冷冻自动化设备的研发及其优化策略
《Cryobiology》:Development of an automated device for the optimization of oocyte and embryo vitrification
【字体: 大 中 小 】 时间:2025年06月10日 来源:Cryobiology 2.3
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为解决辅助生殖技术中人工玻璃化冷冻操作效率低、结果不一致的问题,上海协同创新中心团队研发了集成微流控混合单元、微网格毛细管载体的自动化玻璃化冷冻设备。该设备通过八种CPA(冷冻保护剂)加载/移除曲线优化,实现8分钟内二次函数曲线下90.33%的卵母细胞存活率,与Cryotop多步平衡法(94.33%)无显著差异,为生殖医学提供了标准化解决方案。
全球生育率持续走低背景下,约15%夫妇面临不孕不育困扰,卵母细胞冷冻保存成为生育力保存的关键技术。尽管玻璃化冷冻(Vitrification)已逐步取代慢速冷冻(Slow freezing),但现有技术依赖胚胎学家手工操作,存在效率低下、渗透损伤和细胞转移损耗三大痛点。更棘手的是,冷冻保护剂(Cryoprotective Agent, CPA)浓度骤变导致的渗透压冲击,以及缺乏集成化载体导致的多次转移风险,严重制约着临床结果的稳定性。
针对这些挑战,上海协同创新中心团队在《Cryobiology》发表的研究中,创新性地开发了集微流控混合单元、微网格毛细管载体和机械滑动单元于一体的自动化玻璃化冷冻系统。该系统通过医用吸水敷料控制CPA残留量,在单一载体中完成CPA加载、冷冻和移除全流程,显著降低细胞转移损耗。研究团队特别优化了八种CPA加载/移除曲线,发现8分钟内基于二次函数的浓度变化曲线可使卵母细胞存活率达100%,与传统Cryotop多步平衡法的94.33%相当,且8细胞胚胎的存活率和孵化率无统计学差异。
关键技术方法包括:1) 微流控混合单元实现CPA浓度梯度精确调控;2) 集成微网格毛细管载体同步完成CPA交换与冷冻;3) 机械滑动单元自动化操作流程;4) 使用ICR小鼠模型进行效果验证。
【优化CPA加载和移除】
通过对比6分钟与8分钟两种时长下的四种浓度变化曲线,证实二次函数曲线在8分钟协议中最优。该曲线通过快速达到CPA平衡浓度,有效降低毒性暴露时间,使渗透体积变化控制在10%以内。
【讨论】
该研究突破性地解决了传统玻璃化冷冻中CPA突变性浓度变化导致的渗透损伤问题。微网格毛细管设计使冷却速率达到16,000°C/min,远超常规载体的性能。值得注意的是,系统在保持与Cryotop相当存活率的同时,将操作时间从传统方法的15-20分钟缩短至8分钟,为临床标准化提供可能。
【结论】
这项由Haoyang Lin、Chenxi Liu等完成的研究,首次实现玻璃化冷冻全流程自动化,其创新性体现在:1) 动态CPA梯度控制技术;2) 集成化冷冻载体设计;3) 最优化的二次函数加载曲线。该设备不仅适用于常规IVF实验室,对肿瘤患者生育力保存等时效性要求高的场景更具应用价值,为生殖医学自动化发展树立了新标杆。
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