口腔鳞癌微环境中CXCL1-CXCR2轴的调控机制

Paracrine stimulation of gingival fibroblasts (GFs) by OSCC promotes CAF differentiation
研究团队通过Transwell共培养系统发现，口腔鳞癌细胞系SCC25的条件培养基(CM)能显著诱导牙龈成纤维细胞(GFs)表达α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和波形蛋白(vimentin)等CAF标志物，其诱导效果强于CA9-22和YD8细胞系。值得注意的是，虽然所有测试的OSCC CM均能促进^ACTA2
mRNA表达，但ELISA检测显示各细胞系TGF-β1分泌量无显著差异，暗示存在其他关键因子。功能实验证实，SCC25激活的CAFs通过旁分泌机制显著增强肿瘤细胞增殖（CCK-8检测显示1.5倍增长）、迁移（划痕实验伤口闭合率提升）和侵袭（Transwell穿膜细胞数增加）。

CXCL1 is a crucial factor in OSCC CM-induced CAF differentiation
通过液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术对1129种分泌蛋白进行筛选，发现CXCL1在SCC25-CM中表达最为突出。临床数据分析显示，CXCL1高表达的OSCC患者总体生存率显著降低（GSE3292队列HR=9.16，p=0.0028），且其在癌组织中的表达水平较正常组织上调2.3倍（GEO数据库验证）。这种差异具有诊断价值，因为血清CXCL1水平已被证实与头颈癌放疗失败率正相关。

CXCL1 potentiates TGF-β1-induced CAF differentiation
机制研究发现，虽然10 ng/mL CXCL1单独处理不能诱导CAF标志物表达，但与TGF-β1联用时可协同增强αSMA和波形蛋白表达（免疫荧光显示荧光强度增加1.8倍）。Western blot揭示这种协同作用通过Smad2/3和AKT双通路实现：TGF-β1主要激活Smad2/3磷酸化，而CXCL1特异性增强AKT-Ser⁴⁷³
位点磷酸化。使用TGF-β受体抑制剂SB431542预处理可阻断60%的OSCC-CM诱导效应，证实TGF-β信号的基础必要性。

CXCR2 mediates CXCL1-induced pro-tumorigenic activity
受体筛选实验显示，CXCR2特异性抑制剂SB265610能完全消除CXCL1的协同效应，而CXCR1/2双抑制剂Reparixin仅部分抑制。通过siRNA敲低CXCR2表达（效率达47%）后，CAF标志物表达回落至基线水平，且AKT磷酸化显著减弱（p-AKT/AKT比值下降72%）。功能挽救实验证明，CXCR2缺陷型CAFs的条件培养基丧失促瘤能力：与对照组相比，SCC25细胞增殖率降低40%，迁移速度减缓55%，侵袭能力下降62%。

Stromal CXCR2 drives OSCC tumor expansion
裸鼠移植瘤模型显示，与单独接种SCC25细胞相比，联合移植shControl-GFs使肿瘤体积增加2.1倍（p<0.01），而shCXCR2-GFs组肿瘤生长被抑制40%。免疫组化分析显示，shControl组肿瘤间质中αSMA⁺
/vimentin⁺
CAFs密度是shCXCR2组的3.7倍。通过GFP标记追踪证实，这些活化CAFs直接来源于移植的GFs，且其分化状态依赖CXCR2信号。

讨论与展望
该研究首次阐明CXCL1通过"TGF-β1启动-Smad2/3磷酸化，CXCL1放大-AKT激活"的双轨机制驱动CAF分化。临床转化方面，针对CXCR2的小分子抑制剂（如SB225002）已进入其他癌种的临床试验，本研究为其在OSCC的应用提供理论依据。值得注意的是，单细胞测序最新进展提示CAFs存在myCAF、iCAF等亚群，未来需探究CXCL1-CXCR2轴对不同CAF亚型的选择性调控。此外，口腔潜在恶性病变（如口腔黏膜下纤维化）中CXCL1的早期干预价值也值得探索。